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液相色譜儀串聯(lián)質(zhì)譜的檢測(cè)流程方法總匯

2020-01-07

如今蛋白組/代謝組學(xué)被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域,液相色譜儀串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(液質(zhì)聯(lián)用)是蛋白組/代謝組學(xué)研究的主要手段,因此液質(zhì)聯(lián)用受到了醫(yī)學(xué)科學(xué)的極大重視。那么今天就來了解一下液質(zhì)聯(lián)用的基本流程吧!

 

液相色譜儀

 

液相色譜部分由進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)三個(gè)部分組成

(1)進(jìn)樣裝置要求密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。

(2)輸液系統(tǒng)較為主要的是梯度洗脫裝置——有兩種方式:一種稱低壓梯度,指常壓下溶劑按一定比例混合后再由高壓泵輸入色譜柱,又稱外梯度;另一種稱高壓梯度,指先用高壓泵將各溶劑輸入混合器混合,再送入色譜柱,也稱為內(nèi)梯度。

(3)分離系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。與單純LC相比,LC-MS一般流速較低(高流速可能影響霧化效果),所以一般用窄徑柱,即2 mm或2.1mm的,粒徑一般為3.5μm,也有1.7μm的。

 

液相色譜儀

 

液相色譜儀分析的一般流程

(1)ESI電離:其工作原理是將液滴變成蒸汽,產(chǎn)生離子發(fā)射的過程中形成的溶劑由液相泵輸送到ESI Probe,經(jīng)其內(nèi)的不銹鋼毛細(xì)管流出,這時(shí)給毛細(xì)管加2-4 kv的高壓,由于高壓和霧化氣的作用,流動(dòng)相從毛細(xì)管頂端流出時(shí),會(huì)形成扇狀噴霧,使液滴生成含樣品和溶劑離子的氣溶膠。ESI屬于較軟的電離方式,通常只產(chǎn)生分子離子峰。適合熱不穩(wěn)定的極性分子,能分析小分子及大分子。

(2)四極桿質(zhì)量分析器:四極桿內(nèi)所包圍的空間存在雙曲線形電場(chǎng)。從離子源入射的加速離子穿過四極桿中的電場(chǎng)會(huì)受到電場(chǎng)作用,只有選定的m/z離子以限定的頻率穩(wěn)定的通過四極桿質(zhì)量分析器,其他離子則碰到極桿上被吸濾掉,不能通過,即達(dá)到“濾質(zhì)”的作用。四極桿質(zhì)量分析器結(jié)構(gòu)緊湊,體積小,掃描速度快,適用于LC-MS聯(lián)用儀。

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